Metoda rapidă High Resolution Melting Multiplex pentru analiza mutațiilor genelor FLT3, NPM1 si DNMT3A in leucemia acuta mieloidă – PN-III-P2-2.1-PED-2016-1584 – Cod proiect 147PED/2017
”Metoda rapida high resolution melting multiplex pentru analiza mutatiilor genelor FLT3, NPM1 si DNMT3A in leukemia acuta mieloida” – project financed by a grant of the Romanian National Authority for Scientific Research and Innovation, CNCS/CCCDI – UEFISCDI, project number PN-III-P2-2.1-PED-2016-1584, contract number 147PED/2017.
| Pre Proposal Registration Code | PED-2016-1584 |
| Project Registration Code | 147PED din 03/01/2017 |
| Project Acronym | RAMYELOGEN |
| Purpose and project planning | Acute myeloid leukemia (AML) is characterized by somatic mutations, most frequently interesting the FLT3, NPM1 and DNMT3A genes. The aim of the present project is represented by the creation of a rapid, easy handling test/technique, which reduces reagent usage and costs, aimed at the detection of somatic mutations in genes that are associated with AML (namely FLT3, NPM1, DNMT3A) by using the multiplex high-resolution melting (HRM) method. We plan to develop a multiplex HRM assay for the identification of FLT3, NPM1 and DNMT3A gene mutations; testing the reproducibility and specificity of the multiplex HRM method for FLT3, NPM1 and DNMT3A genotyping by using Competitive Allele–Specific TaqMan (castPCR) technology, a highly specific and sensitive method, which allows us to detect and quantitate rare amounts of mutated DNA and to verify the accuracy of the test through independent techniques such as PCR-RFLP, real time PCR and/or Sanger sequencing performed in the investigated genes. |
| Project Start Date | 03.01.2017 |
| Project End Date | 30.06.2018 |
| Project Duration | 18 months |
| Main objectives | The first objective of the project is represented by developing a multiplex HRM assay for the identification of FLT3, NPM1 and DNMT3A gene mutations in AML patients. The second objective is testing the reproducibility and specificity of the multiplex HRM method for FLT3, NPM1 and DNMT3A genes. To assess the specificity of the HRM test the results will be verified by Competitive Allele–Specific TaqMan (castPCR) technology, a highly specific and sensitive method, which allows us to detect and quantitate rare amounts of mutated DNA. The third objective is to verify the accuracy of the test through independent techniques such as PCR-RFLP, real time PCR and/or Sanger sequencing. |
| Team: | Claudia Banescu -> Project manager Adrian Trifa -> Researcher Delia Dima -> Researcher Peter Olah -> Postdoctoral researcher Valeriu Moldovan -> PHD student Florin Tripon -> PHD student Andrei Crauciuc -> PHD student Alina Boglis -> PHD student |
| Results | The end-result of the project consists in a multiplex HRM method, which will be useful in AML diagnosis, will be a useful biomarker for assessing response to treatment. We intend to provide a relatively inexpensive, rapid and easy handling panel method for providing a complete patient profile from a single sample. |
| Host institution | University of Medicine and Pharmacy of Tirgu Mures |
Actualizare1 – 19.01.2018
Descriere activitate
S-a solicitat acordul comisiei de Etica a Universitatii de Medicina si Farmacie Tirgu Mures, proiectul fiind avizat favorabil (aviz nr. 67 din 14.04.2017).
Izolarea acizilor nucleici (ADN, ARN) s-a facut din sange venos periferic, obtinut la diagnostic, recoltat pe EDTA (2 ml de sânge) conform protocolului de lucru recomandat de producӑtorul kiturilor de extracţie (Purelink genomic DNA kit de la invitrogen, respectiv Quick-RNA Whole Blood de la ZymoResearch). Proba de sange s-a recoltat dupa obtinerea acordului informat al pacientului.
Dupa izolare, produsele ADN si ARN au fost cuantificate cu ajutorul sistemului Eppendorf BioSpectrometer.
Pentru analiza de tip HRM, s-a efectuat design de primeri (Primer Express® Software v3.0., Primer 3, NCBI-FASTA Primer Blast) si au fost puse la punct metodele individuale de analiza HRM pentru genele FLT3-ITD, NPM1 (pentru analiza mutatiei c.863_864insTCTG sau p.W288fs*12) si pentru gena DNMT3A regiunea R882. Primeri sens si antisens realizati au avut o lungime cuprinsa intre 120-300 pb.
Pentru testarea specificitatii metodei HRM pentru gena NPM1 mutatiei c.863_864insTCTG s-a folosit tehnologia Competitive Allele–Specific TaqMan® (castPCR™) prin utilizarea kitului TaqMan mutation detection assays Hs00000953_mu pentru analiza alelei variante si a genei de referinta TaqMan Mutation Detection Reference Assays (gene reference assays NPM1). Intre cele 2 metode utilizate s-a observant o concordanta de 100%.
Pentru testarea specificitatii metodei HRM pentru gena FLT3-ITD s-a efectuat tehnica PCR, concordanta fiind de 100% intre probele analizate pentru ambele metode utilizate.
Pentru gena DNMT3A regiunea R882 nu a existat concordanta intre tehnica PCR-RFLP (polimorfismul lungimiii fragmentelor de restrictive-reactia polimerizarii in lant si tehnica HRM utilizata. Din acest motiv se va face un nou design de primeri pentru analiza DNMT3A r882 prin HRM si se va face analiza de fragmente la acest nivel (utilizand sistemul 3500xL Dx).
Instruiri ale mebrilor echipei de cercetare efectuate in cadrul proiectului:
– participarea la workshopul MLPA, care a precedat conferinta si a abordat dificultatile in analiza MLPA, interpretarea rezultatelor cu ajutorul softului Coffalyser
– cursul practic intitulat „Tehnici moleculare in diagnosticul si screeningul genetic. De la nucleotid la genom.” care a avut loc în perioada 3-5 Septembrie 2017, in Craiova.
Diseminare:
1. “Association of TGF-β1 T869C polymorphism with FLT3 mutation in AML patients” / “Polimorfismul TGF-Β1 T869C este asociat cu mutația FLT3 la pacienții cu LAM” autori Banescu Claudia, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Tripon Florin, Demian Smaranda, Duicu Carmen. la A 2-a Conferinţă Naţională a Asociaţiei de Medicină de Laborator din România cu participare internaţională, 10 -12 mai 2017 la Timisoara. http://www.rrml.ro/articole/2017/2017_1_supliment.pdf
2. “No influence of XPC gene polymorphisms on FLT3 or DNMT3A mutations in acute myeloid leukemia patients” autori Bănescu Claudia, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Tripon Florin, Benedek Lazar Erzsebeth, Duicu Carmen. 27 – 30 mai 2017 Copenhaga, Danemarca. https://www.eshg.org/95.0.html
3. “No association between TNF alpha A308G gene polymorphism and FLT3 genes mutation in patients with acute myeloid leukemia” autori Tripon Florin, Crauciuc Andrei, Duicu Carmen, Boglis Alina, Moldovan Valeriu, Smaranda Demian, Bănescu Claudia. 27 -30 mai 2017 Copenhaga, Danemarca. https://www.eshg.org/95.0.html
4. No association between TERT rs2736100 A>C SNP, FLT3 ITD and FLT3 D835 gene mutations and acute myeloid leukemia” Tripon Florin, Crauciuc George Andrei, Bogliş Alina, Moldovan Valeriu, Duicu Carmen, Lazar Erzsebeth, Trifa Pavel Adrian, Bănescu Claudia, 6-8 Septembrie 2017 Craiova
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
5. “TNF-Α 238A>G gene polymorphisms are not associated with FLT3 ITD gene mutation and the risk of developing AML” autori Andrei Crauciuc, Florin Tripon, Valeriu Moldovan, Bogliș Alina, Ioan Macarie, Claudia Bănescu, 6-8 Septembrie 2017 Craiova.
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
6. “Prognostic value of ABCG2 gene Q141K polymorphism in Romanian patients with acute myeloid leukemia with FLT3 mutation” autori Bogliș Alina, Tripon Florin, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Trifa Adrian, Lazar Erzsebeth, Claudia Bănescu, 6-8 Septembrie 2017 Craiova.
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
7. Influence of TNF-Α rs1800750 gene polymorphism on the risk and relationship with prognostic factors (DNMT3A, FLT3 MUTATIONS) in acute myeloid leukemia. Autori Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Crauciuc Andrei, Tripon Florin, Banescu Claudia. 6-8 Septembrie 2017 Craiova.
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
8. Investigation of NPM1 type A mutation by HRM, castPCR and allele specific RT-PCR methods in acute myeloid leukemia. Autori Banescu Claudia, Tripon Florin, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Crauciuc Andrei, Trifa P Adrian. Zilele Universității de Medicină și Farmacie din Tîrgu Mureș. Sesiunea științifică a cadrelor didactice 11-15 decembrie 2017.
http://actamedicamarisiensis.ro/wp-content/uploads/2017/10/AMM_63_S4_web.pdf
9. Utility of Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification technique in patients with Acute Myeloid Leukemia. Tripon Florin, Lazar Erzsebeth, Demian Smaranda, Banescu Claudia. Zilele Universității de Medicină și Farmacie din Tîrgu Mureș. Sesiunea științifică a cadrelor didactice 11-15 decembrie 2017.
http://actamedicamarisiensis.ro/wp-content/uploads/2017/10/AMM_63_S4_web.pdf
Actualizat informatii la data de 29.06.2018
In urma derularii proiectului s-a reusit realizarea unei tehnici rapide de tip multiplex high resolution melting (HRM) pentru detectarea mutațiilor somatice în gene care sunt asociate cu LAM și anume FLT3 ITD, DNMT3A R882, NPM1 c.863_864insTCTG (mutatie de tip A)
Initial s-au efectuat analize de tip HRM pentru fiecare mutatie FLT3 ITD, DNMT3A R,882, NPM1 c.863_864insTCTG, apoi s-a inceput cu analize de tip duplex (tehnica fiind adaptata pentru analiza a cate 2 mutatii FLT3 ITD si NPM1, FLT3 ITD si DNMT3A R882, NPM1 si DNMT3A R882). In final s-a efectuat tehnica HRM multiplex pentru cele 3 mutatii propuse si anume FLT3 ITD, DNMT3A R,882, NPM1 mutatiei c.863_864insTCTG. A fost necesara ajustarea treptata temperaturilor de melting, a concentratiei si cantitatii de primeri utilizati in mixul de reactive. In final s-a reusit realizarea tehnicii de tip multiplex pentru FLT3 ITD, DNMT3A R882, NPM1 c.863_864insTCTG intr-o singura reactive.
Reproductibilitatei si specificitatea metodei HRM pentru NPM1 s-a folosit tehnologia Competitive Allele–Specific TaqMan® (castPCR™) prin utilizarea kitului TaqMan mutation detection assays Hs00000953_mu pentru analiza alelei variante si a genei de referinta TaqMan Mutation Detection Reference Assays (gene reference assays NPM1). Intre cele 2 metode utilizate s-a observant o concordanta de 100%, realizata pe 146 probe.
Pentru tehnica castPCR s-a utilizat: mix de genotipare TaqMan 2x, ADN genomic de analizat, IPC (control pozitiv intern IPC), apa libera de nucleaze, TaqMan® Mutation Detection Assay (alela mutanta sau referinta), sistemul Fast 7500 Real Time-PCR, si softul Mutation Detector™ Software.
Pentru testarea specificitatii metodei HRM pentru gena FLT3-ITD s-a efectuat tehnica PCR, concordanta fiind de 90% intre probele analizate (146 de cazuri) Dezavantajul acestei tehnici de PCR si electroforeza in gel de agaroza il reprezinta faptul ca nu poate fi cuantificata clona mutanta.
Pentru gena DNMT3A regiunea R882 nu a existat concordanta intre tehnica PCR-RFLP (polimorfismul lungimiii fragmentelor de restrictive-reactia polimerizarii in lant si tehnica HRM utilizata. Din acest motiv s-a efectuat un nou design de primeri pentru analiza DNMT3A R882 prin HRM si s-a efectuat analiza prin tehnica PCR si digestive enzimatica si elecroforeza in gel de agaroza. Probele de AND la care s-au evidentiat modificari la nivelul genei DNMT3A R882 prin tehnica HRM au fost supuse reactiei de secventiere la nivelul regiunii R882 (utilizand sistemul 3500xL Dx).
De asemenea au fost analizate microdeletiile cu ajutorul kitului MLPA P377 care permite analiza la nicvelul 2p (MYCN, ALK), 5q (MIR145, EBF1,MIR146A), 6q, 7p12 (IKZF1), 7q, 8q24 (MYC), 9p (MTAP, CDKN2A, CDKN2B, PAX5), 10q23 (PTEN), 11q22 (ATM), 12p13 (ETV6), 12q, 13q14 (RB1, MIR15A, DLEU2, DLEU1), 17p13 (TP53), 17q, Chr 18, Chr 19, 21q22 (RUNX1), mutatia JAK2 V617F.
Kitul MLPA X0-60 a fost utilizat pentru a verifica sensibilitatea metodelor utilizate (cast PCR, HRM, PCR-RFLP, electroforeza d efragmente, secventiere) la nivelul genelor NPM1 exon 12, FLT3 exon 20, IDH1 exon 6, DNMT3A exon 23. Concordanta intre testul HRM, CastPCR, PCR-RFLP si rezultatele obtinute prin utilizarea kitului MLPA X0-60 a fost scazuta, sub 50%..
Pentru cuantificarea clonelor mutante FLT3 ITD si NPM1 c.863_864insTCTG s-a efectuat analiza de fragmente prin electroforeza capilara, utilizadu-se primeri dedicati marcati cu flurofori iar produsii de amplificare au fost separati prin electroforeza capilara cu ajutorul sistemului 3500 xL Dx. Astfel s-a indeplinit si al doilea obiectiv al proiectului si anume testarea reproductibilitatii si specificitatii metodei HRM pentru FLT3, NPM1 prin aceasta tehnica.
De asemenea s-a incercat sa se vada daca exista corelatii intre prezenta mutatiilor (FLT3, DNMT3A si NPM1) identificate prin metodele propuse in proiect la pacientii analizati si diverse polimorfisme mononucleotidice (SNPs) si sa se stabileasca valoarea prognostica a acestora. In acest sens au fost analizate polimorfismele la nivelul genei TERT (Telomerase reverse transcriptase gene) si anume rs2736100 si rs2853669, prin utilizarea utilizarea sondelor de tip Taqman dedicate genotiparii polimorfismelor de interes. Analiza acestor SNP-uri la 146 cazuri cu LAM nu a evidentiat asocieri semnificative intre variant alelica sau genotip variant si prezenta mutatiilor somatice FLT3 ITD, DNMT3A R882, NPM1 c.863_864insTCTG (tipul A de mutatie la nivelul NPM1). Rezultatele obtinute in urma acestor analize au fost trimise spre publicare la o revista recunoscuta in domeniu, indexata in Isi web of Science cu factor de impact.
De asemenea au fost analizate si polimorfismele la nivelul genelor pentru cytokine (TNF alfa, TGF beta. In aceste studii au fost analizate si relatiile dinte aceste polimorfisme si mutatiile somatice de la nvelul genelor FLT3, NPM1 si DNMT3A. rezultatele obtinute au post comunicate la diferite manifestari stiintifice nationale si internationale.
Actualizat informatii la data de 29.06.2018
In urma derularii proiectului s-a reusit realizarea unei tehnici rapide de tip multiplex high resolution melting (HRM) pentru detectarea mutațiilor somatice în gene care sunt asociate cu LAM și anume FLT3 ITD, DNMT3A R882, NPM1 c.863_864insTCTG (mutatie de tip A)
Initial s-au efectuat analize de tip HRM pentru fiecare mutatie FLT3 ITD, DNMT3A R,882, NPM1 c.863_864insTCTG, apoi s-a inceput cu analize de tip duplex (tehnica fiind adaptata pentru analiza a cate 2 mutatii FLT3 ITD si NPM1, FLT3 ITD si DNMT3A R882, NPM1 si DNMT3A R882). In final s-a efectuat tehnica HRM multiplex pentru cele 3 mutatii propuse si anume FLT3 ITD, DNMT3A R,882, NPM1 mutatiei c.863_864insTCTG. A fost necesara ajustarea treptata temperaturilor de melting, a concentratiei si cantitatii de primeri utilizati in mixul de reactive. In final s-a reusit realizarea tehnicii de tip multiplex pentru FLT3 ITD, DNMT3A R882, NPM1 c.863_864insTCTG intr-o singura reactive.
Reproductibilitatei si specificitatea metodei HRM pentru NPM1 s-a folosit tehnologia Competitive Allele–Specific TaqMan® (castPCR™) prin utilizarea kitului TaqMan mutation detection assays Hs00000953_mu pentru analiza alelei variante si a genei de referinta TaqMan Mutation Detection Reference Assays (gene reference assays NPM1). Intre cele 2 metode utilizate s-a observant o concordanta de 100%, realizata pe 146 probe.
Pentru tehnica castPCR s-a utilizat: mix de genotipare TaqMan 2x, ADN genomic de analizat, IPC (control pozitiv intern IPC), apa libera de nucleaze, TaqMan® Mutation Detection Assay (alela mutanta sau referinta), sistemul Fast 7500 Real Time-PCR, si softul Mutation Detector™ Software.
Pentru testarea specificitatii metodei HRM pentru gena FLT3-ITD s-a efectuat tehnica PCR, concordanta fiind de 90% intre probele analizate (146 de cazuri) Dezavantajul acestei tehnici de PCR si electroforeza in gel de agaroza il reprezinta faptul ca nu poate fi cuantificata clona mutanta.
Pentru gena DNMT3A regiunea R882 nu a existat concordanta intre tehnica PCR-RFLP (polimorfismul lungimiii fragmentelor de restrictive-reactia polimerizarii in lant si tehnica HRM utilizata. Din acest motiv s-a efectuat un nou design de primeri pentru analiza DNMT3A R882 prin HRM si s-a efectuat analiza prin tehnica PCR si digestive enzimatica si elecroforeza in gel de agaroza. Probele de AND la care s-au evidentiat modificari la nivelul genei DNMT3A R882 prin tehnica HRM au fost supuse reactiei de secventiere la nivelul regiunii R882 (utilizand sistemul 3500xL Dx).
De asemenea au fost analizate microdeletiile cu ajutorul kitului MLPA P377 care permite analiza la nicvelul 2p (MYCN, ALK), 5q (MIR145, EBF1,MIR146A), 6q, 7p12 (IKZF1), 7q, 8q24 (MYC), 9p (MTAP, CDKN2A, CDKN2B, PAX5), 10q23 (PTEN), 11q22 (ATM), 12p13 (ETV6), 12q, 13q14 (RB1, MIR15A, DLEU2, DLEU1), 17p13 (TP53), 17q, Chr 18, Chr 19, 21q22 (RUNX1), mutatia JAK2 V617F.
Kitul MLPA X0-60 a fost utilizat pentru a verifica sensibilitatea metodelor utilizate (cast PCR, HRM, PCR-RFLP, electroforeza d efragmente, secventiere) la nivelul genelor NPM1 exon 12, FLT3 exon 20, IDH1 exon 6, DNMT3A exon 23. Concordanta intre testul HRM, CastPCR, PCR-RFLP si rezultatele obtinute prin utilizarea kitului MLPA X0-60 a fost scazuta, sub 50%..
Pentru cuantificarea clonelor mutante FLT3 ITD si NPM1 c.863_864insTCTG s-a efectuat analiza de fragmente prin electroforeza capilara, utilizadu-se primeri dedicati marcati cu flurofori iar produsii de amplificare au fost separati prin electroforeza capilara cu ajutorul sistemului 3500 xL Dx. Astfel s-a indeplinit si al doilea obiectiv al proiectului si anume testarea reproductibilitatii si specificitatii metodei HRM pentru FLT3, NPM1 prin aceasta tehnica.
De asemenea s-a incercat sa se vada daca exista corelatii intre prezenta mutatiilor (FLT3, DNMT3A si NPM1) identificate prin metodele propuse in proiect la pacientii analizati si diverse polimorfisme mononucleotidice (SNPs) si sa se stabileasca valoarea prognostica a acestora. In acest sens au fost analizate polimorfismele la nivelul genei TERT (Telomerase reverse transcriptase gene) si anume rs2736100 si rs2853669, prin utilizarea utilizarea sondelor de tip Taqman dedicate genotiparii polimorfismelor de interes. Analiza acestor SNP-uri la 146 cazuri cu LAM nu a evidentiat asocieri semnificative intre variant alelica sau genotip variant si prezenta mutatiilor somatice FLT3 ITD, DNMT3A R882, NPM1 c.863_864insTCTG (tipul A de mutatie la nivelul NPM1). Rezultatele obtinute in urma acestor analize au fost trimise spre publicare la o revista recunoscuta in domeniu, indexata in Isi web of Science cu factor de impact.
De asemenea au fost analizate si polimorfismele la nivelul genelor pentru cytokine (TNF alfa, TGF beta. In aceste studii au fost analizate si relatiile dinte aceste polimorfisme si mutatiile somatice de la nvelul genelor FLT3, NPM1 si DNMT3A. rezultatele obtinute au post comunicate la diferite manifestari stiintifice nationale si internationale.
Membrii echipei proiectului au participat la diverse conferinte:
- internationale (European Human Genetics Conference (ESHG), 27 – 30 mai 2017 Copenhaga, Danemarca, 19th Annual John Goldman Conference on Chronic Myeloid Leukemia: Biology and Therapy, octombrie 2017, Estoril, Portugalia; European Human Genetics Conference (ESHG), June 16-19, 2018 in Milan, Italy) sau
- nationale (A 2-a Conferinţă Naţională a Asociaţiei de Medicină de Laborator din România cu participare internaţională, 10-12 mai 2017 la Timisoara; A X-a Conferinta de Genetica Medicala cu participare internaţionala, Craiova, 6-8 septembrie 2017, Zilele Universității de Medicină și Farmacie din Tîrgu Mureș. Sesiunea științifică a cadrelor didactice 11-15 decembrie 2017 Tg Mures; Al 2-lea Congres national al asociatiei de medicina de laborator din Romania cu participare internationala, 09.05-12.05.2018 Bucuresti) unde au prezentat rezultatele partiale ale proiectului.
A fost creata o baza de date cu rezultatele obtinute in cadrul proiectului. Pentru respectarea confidentialitatii pacientului sau utilizat coduri si nu datele de identificare ale acestuia, datele personale fiind confidentiale.
Rezultatele cercetarii, si anume tehnica de tip multiplex HRM pentru mutatiile FLT3 ITD, DNMT3A R882, NPM1 c.863_864insTCTG vor fi valorificate prin solicitarea unui brevet de inventie catre OSIM.
Diseminare:
1. “Association of TGF-β1 T869C polymorphism with FLT3 mutation in AML patients” / “Polimorfismul TGF-Β1 T869C este asociat cu mutația FLT3 la pacienții cu LAM” autori Banescu Claudia, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Tripon Florin, Demian Smaranda, Duicu Carmen. la A 2-a Conferinţă Naţională a Asociaţiei de Medicină de Laborator din România cu participare internaţională, 10 -12 mai 2017 la Timisoara. http://www.rrml.ro/articole/2017/2017_1_supliment.pdf
2. “No influence of XPC gene polymorphisms on FLT3 or DNMT3A mutations in acute myeloid leukemia patients” autori Bănescu Claudia, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Tripon Florin, Benedek Lazar Erzsebeth, Duicu Carmen. 27 – 30 mai 2017 Copenhaga, Danemarca. https://www.eshg.org/95.0.html
3. “No association between TNF alpha A308G gene polymorphism and FLT3 genes mutation in patients with acute myeloid leukemia” autori Tripon Florin, Crauciuc Andrei, Duicu Carmen, Boglis Alina, Moldovan Valeriu, Smaranda Demian, Bănescu Claudia. 27 -30 mai 2017 Copenhaga, Danemarca. https://www.eshg.org/95.0.html
4. No association between TERT rs2736100 A>C SNP, FLT3 ITD and FLT3 D835 gene mutations and acute myeloid leukemia” Tripon Florin, Crauciuc George Andrei, Bogliş Alina, Moldovan Valeriu, Duicu Carmen, Lazar Erzsebeth, Trifa Pavel Adrian, Bănescu Claudia, 6-8 Septembrie 2017 Craiova
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
5. “TNF-Α 238A>G gene polymorphisms are not associated with FLT3 ITD gene mutation and the risk of developing AML” autori Andrei Crauciuc, Florin Tripon, Valeriu Moldovan, Bogliș Alina, Ioan Macarie, Claudia Bănescu, 6-8 Septembrie 2017 Craiova.
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
6. “Prognostic value of ABCG2 gene Q141K polymorphism in Romanian patients with acute myeloid leukemia with FLT3 mutation” autori Bogliș Alina, Tripon Florin, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Trifa Adrian, Lazar Erzsebeth, Claudia Bănescu, 6-8 Septembrie 2017 Craiova.
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
7. Influence of TNF-Α rs1800750 gene polymorphism on the risk and relationship with prognostic factors (DNMT3A, FLT3 MUTATIONS) in acute myeloid leukemia. Autori Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Crauciuc Andrei, Tripon Florin, Banescu Claudia. 6-8 Septembrie 2017 Craiova.
http://www.srgm.ro/upload/content/RJRD_2017_siplement_2.pdf
8. Investigation of NPM1 type A mutation by HRM, castPCR and allele specific RT-PCR methods in acute myeloid leukemia. Autori Banescu Claudia, Tripon Florin, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Crauciuc Andrei, Trifa P Adrian. Zilele Universității de Medicină și Farmacie din Tîrgu Mureș. Sesiunea științifică a cadrelor didactice 11-15 decembrie 2017.
http://actamedicamarisiensis.ro/wp-content/uploads/2017/10/AMM_63_S4_web.pdf
9. Utility of Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification technique in patients with Acute Myeloid Leukemia. Tripon Florin, Lazar Erzsebeth, Demian Smaranda, Banescu Claudia. Zilele Universității de Medicină și Farmacie din Tîrgu Mureș. Sesiunea științifică a cadrelor didactice 11-15 decembrie 2017.
http://actamedicamarisiensis.ro/wp-content/uploads/2017/10/AMM_63_S4_web.pdf
10. Investigation of microdeletions and somatic mutations with prognostic impact in patients with acute myeloid leukemia. Banescu Claudia, Tripon Florin, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Demian Smaranda, Lazar Erzsebet, Duicu Carmen, Trifa P Adrian. 2nd National Congress of the Romanian Association of Laboratory Medicine with International Participation, Bucharest, Romania 9-12 may 2018, Rev Romana Med Lab. 2018; 26(2) Supplement: S.61-S62 http://www.rrml.ro/articole/2018/2018_2_supliment.pdf
11. No association between TERT rs2853669 polymorphism and NPM1, DNMT3A gene mutations and acute myeloid leukemia risk. Banescu Claudia, Crauciuc Andrei, Moldovan Valeriu, Boglis Alina, Lazar Erzsebeth, Tripon Florin. European Human Genetics Conference (ESHG), June 16-19, 2018 in Milan, Italy. http://www.abstractsonline.com/pp8/#!/4652
12. No association between rs1534309 gene polymorphism and FLT3 ITD mutation in patients with acute myeloid leukemia. Tripon Florin, Crauciuc Andrei Lazar Erzebeth, Trifa Adrian, Banesc Claudia. European Human Genetics Conference (ESHG), June 16-19, 2018 in Milan, Italy. http://www.abstractsonline.com/pp8/#!/4652