Dezvoltarea unui model experimental de predicție genetica microarray multiplex ca instrument in determinarea profilului de risc genetic pentru boala coronariana aterosclerotică în populația românească – cod: PN-1II-P2-2.1-PED-2016-0734 – acronim GeASPro – Cod Proiect 155 PED, director proiect: prof. dr. Minodora Dobreanu
DEZVOLTAREA UNUI MODEL EXPERIMENTAL DE PREDICTIE GENETICA MICROARRAY MULTIPLEX CA INSTRUMENT IN DETERMINAREA PROFILULUI DE RISC GENETIC DE BOALA CORONARIANA ATEROSCLEROTICA IN POPULATIA ROMANEASCA
| Pre Proposal Registration Code | PED-2016-0734 |
| Project Registration Code | PN-III-P2-2.1-PED-2016-0734 |
| Project Acronym | GeASRPro |
| Purpose and project planning | Coronary artery disease (CAD) is the leading cause of morbidity and mortality with a high prevalence in Romania. Although some genetic risk scores were validated in large-scale epidemiology studies in other countries, the cardiovascular genetic risk profile of the Romanian population is unknown. We aim to find an experimental multigenic model of CAD risk factors, characteristic for the Romanian population, to be further used to produce a multiplex array, in order to empower the Romanian medical community with a usable tool to seek change regarding how genetic atherosclerotic coronary artery disease (ASCAD) factors are detected and managed. |
| Project Start Date | 03.01.2017 |
| Project End Date | 30.06.2018 |
| Project Duration | 18 months |
| Main objectives | We propose a cross-sectional study on a statistically representative Romanian group of ASCAD unrelated adult patients and controls to determine the most prevalent and relevant genetic risk factors for CAD. We selected a candidate gene panel previously reported in individuals of European ancestry at genome-wide significance. It consists of the most frequent genes found to be implicated in cardiovascular disease, inflammation, atherosclerosis, FH, acute phase and stress response, hypertension and obesity. Candidates for FH array testing will be selected and analyzed for specific mutations in LDLR, ApoB and PCSK9 genes. |
| Team: | Minodora Dobreanu -> Project Director Claudia Bănescu -> Researcher Hadadi Laszlo -> Researcher Moldovan Valeriu -> Assistant Researcher Huțanu Adina -> Assistant Researcher Șerban Răzvan Constantin -> Researcher |
| Results | Obtaining of a representative genetic panel for ASCAD in the Romanian population, would have major and immediate clinical implications, with a view to promote early diagnosis and a more effective personalized prophylactic treatment of subjects with high ASCAD risk. |
| Host institution | University of Medicine and Pharmacy of Tirgu Mures |
| Activități desfășurate/perioada | Componente | Livrabile / Participanți |
| 1. Pregătirea studiului, realizarea bazei de date, achiziționarea materialelor: Ianuarie-aprilie 2017 | a. Stabilirea parametrilor clinici/ experimentali de achiziționat și conceperea chestionarului de racolare pacienți | Chestionar Racolare (1), DM, HL, MV, SRC |
| b. S-a solicitat acordul comisiei de Etica a Institutului de Urgenta de Boli Cardiovasculare si Transplant Tg. Mures și a UMF Tg.Mures | Aviz favorabil nr. 486 din 19.01.2017 (2) si 73/ 14.04.2017 (3), DM | |
| c. Conceperea și realizarea bazei de date | Baza de date, DM, MV | |
| d. Obținerea consimțământului informat | Formulare informare pacient (4) și consimțământ (5), DM, MV | |
| e. Achiziționarea materialelor și reactivilor necesari | Proceduri achiziție, caiete sarcini, DM, BC, HA | |
| f. Training tehnici de inaltă performanță | -training pentru echipamentul MULTIPLEX –(HA) -rularea biochipurilor FH I si FH II, Randox Evidence Investigator, in prezenta reprezentanților RANDOX, UK (MV) |
|
| 2. Recrutare pacienți; Martie 2017- continuu | a. Evaluarea angiografică de includere | Includere pacienți și completare informații pentru membrii grupului de lucru, HL, SRC |
| b. Racolare subiecți prin anunț mass media | http://ccamf.umftgm.ro/news.php DM, MV | |
| c. Obținerea și înregistrarea detaliată a datelor din istoricul medical și personal al pacienților incluși | Chestionare completate MV, DM, voluntari rezidenți și studenți cerc științific | |
| d. Recoltare probe de sânge | Separare ser, plasmă, ADN, ARN / eșantionare și crioprezervare la -86C; HA, laborant, MV | |
| e. Screening-ul de excludere pentru diabet, patologie renală/hepatică /tiroidiană cronică | Teste biochimice și imunologice: glicemie, creatinina, transaminaze, HBsAg, antiHCV, TSH / FT4. HA, biologi CCAMF | |
| f. Caracterizarea fenotipică a pacienților incluși | Teste biochimice și imunologice: colesterol total, HDL-C, LDL-C, trigliceride, glicemie, creatinina, acid uric, transaminaze, ApoA1, ApoA2, ApoE, Lp(a). HA, biologi CCAMF | |
| 3. Stabilirea panelului experimental genetic, Martie 2017 | a. Selectarea panelului genetic FHC biochip, MLPA | Panel de testare FHC I și FHC II (6), DM, BC, MV |
| b. Selectarea panelului experimental de expresie genică Taq Man qPCR | 56 parametri genetici din panelurile Thermo Scientific (Cardiovascular disease Panel, Atherosclerosis panel, Human LDL Pathways Panel); BC, DM | |
| 4. Caracterizare genotipică a pacienților, Iunie-Decembrie 2017 | a. Extracție ADN | Separare ADN, eșantionare și crioprezervare; MV |
| b. Extracție ARN și RT PCR | Crioprezervare transcipte cADN; MV | |
| c. Efectuarea testărilor moleculare pentru FHC | Rulare biochip-uri FHC; MV | |
| 5. Analiza și interpretarea intermediară a datelor Noiembrie-Decembrie 2017 | a. Completarea bazei de date | Inregistrarea în baza de date a tuturor datelor clinice și experimentale; DM, tehnicieni |
| b. Analiza statistică intermediară | Rezultate parțiale; DM, BC, MV | |
| 6. Interpretare și comunicare rezultate parțiale, Decembrie 2017 | a. Elaborarea rapoartelor | Raport 2017, DM |
| b. Conceperea comunicărilor | 3 Comunicări la manifestări naționale și locale; DM, MV, BC | |
| 7. Caracterizare genotipică a pacienților Ianuarie-Mai 2018 | a. Extracție ADN | Separare ADN, eșantionare și crioprezervare; MV |
| b. Extracție ARN și RT PCR | Crioprezervare transcipte cADN; MV | |
| c. Efectuarea testărilor moleculare pentru MLPA, genotipare TaqMan | Rulare MLPA, Taq Man; MV, CB | |
| d. EXPRESIE GENICĂ TAQMAN – 12K | Efectuare este expresie genica; CB, MV | |
| 8. Analiza și interpretarea finală a datelor Ianuarie-Iunie 2018 | a. Completarea bazei de date | Inregistrarea în baza de date a tuturor datelor clinice și experimentale; DM, tehnicieni |
| b. Analiza statistică finala | Rezultate finale; DM, BC, MV, HL, AH, RS | |
| 9. Interpretare și comunicare rezultate Aprilie-Iunie 2018 | a. Elaborarea rapoarte | Raport final, DM |
| b. Conceperea comunicărilor/articole | 2 Comunicări la manifestări naționale, 4 publicatii (2 in curs de evaluare); DM, AH, MV, BC, HL, RS |
Diseminare
Publicate:
1. Predicting functional outcome of ischemic stroke patients in Romania based on plasma CRP, sTNFR-1, D-Dimers, NGAL and NSE measured using a biochip array, Adina HUȚANU, Mihaela IANCU, Rodica BĂLAȘA, Smaranda MAIER, Minodora DOBREANU – Acta Pharmacologica Sinica 2018: 1–9, doi: 10.1038/aps.2018.26, IF 2016=3,223
2. Optimization of a density gradient centrifugation protocol for isolation of peripheral blood mononuclear cells, Georgiana Șerban Bogdan Mănescu, Doina Manu, Minodora Dobreanu – Acta Medica Marisiensis, 2018, DOI: 10.2478/amma-2018-0011.
Comunicate:
1. FAMILIAL HYPERCHOLESTEROLAEMIA DIAGNOSIS: A CHALLENGE, Valeriu MOLDOVAN, Claudia BĂNESCU, Elena MOLDOVAN, Răzvan ȘERBAN, Minodora DOBREANU. la A 2-a Conferinţă Naţională a Asociaţiei de Medicină de Laborator din România cu participare internaţională, 10 -12 mai 2017 la Timisoara, http://rrml.ro/articole/2017/2017_1_supliment.pdf.
2. DEVELOPMENT OF A PREDICTIVE MULTIPLEX MICROARRAY MODEL USABLE AS A TOOL FOR DETERMINATION OF CORONARY ARTERY DISEASE GENETIC RISK IN THE ROMANIAN POPULATION, Minodora DOBREANU, Valeriu MOLDOVAN, Adina HUȚANU, Claudia BĂNESCU, A 2-a Conferinţă Naţională a Asociaţiei de Medicină de Laborator din România cu participare internaţională, 10 -12 mai 2017 la Timisoara, http://rrml.ro/articole/2017/2017_1_supliment.pdf.
3. Biochip array technology in multiplex analysis of familial hypercholesterolemia – performance of Randox FH biochips in relationship with DLCN score, Moldovan George-Valeriu, Bănescu Claudia, Dobreanu Minodora. Zilele Universității de Medicină și Farmacie din Tîrgu Mureș. Sesiunea științifică a cadrelor didactice 11-15 decembrie 2017.
4. APOB P.ARG3527GLN MUTATION CAUSES FAMILIAL HYPERCHOLESTEROLEMIA, George-Valeriu Moldovan, Claudia Bănescu, Laszlo Hadadi, Răzvan Serban, Irina Pintilie, Minodora Dobreanu – 2nd Congress of RALM, Bucuresti 9-12 mai 2018, in Rev Romana Med Lab, 2018, Supl 26 (2), p.S86-S87. http://rrml.ro/articole/2018/2018_2_supliment.pdf
5. DIFFERENT PATTERN OF FATTY ACIDS PROFILE IN ERYTHROCYTE MEMBRANES AND PLASMA OF ISCHAEMIC STROKE PATIENTS COMPARED TO HEALTHY CONTROLS, Huțanu Adina, MD; Balasa Rodica; Barbu Stefan; Maier Smaranda; Tero-Vescan Amelia; Oprea Oana; Dobreanu Minodora – 2nd Congress of RALM, Bucuresti 9-12 mai 2018, in Rev Romana Med Lab, 2018, Supl 26 (2), p.S100-S101. http://rrml.ro/articole/2018/2018_2_supliment.pdf
II. Aflate in evaluare in vederea publicării:
1. Extended lipid profile in Romanian ischemic stroke patients in relationship with stroke severity and outcome: a path analysis model, Adina Huțanu, Mihaela Iancu, Minodora Dobreanu, Oana Oprea, Ștefan Barbu, Smaranda Maier, Amelia Tero-Vescan, Zoltan Bajko, Rodica Bălașa – Archives of Medical Science, 2018.
2. Renal dysfunction is associated with lower incidence of positive fractional flow reserve values and higher distal coronary artery pressures in patients with severe hypertension, Hadadi László, Tamás Juhász Răzvan Constantin Serban, Oana Dascăl, Cristina Somkereki, Zoltán Demjén, István Adorján, Silvia Lupu, in Rev Romana Med Lab, 2018.